丹顶鹤恶臭假单胞菌的分离及生物学特性鉴定

某动物园送来了一只病死的丹顶鹤，该鹤病初排稀粪，3～4天后死亡。经过剖检发现肝脏表面有米粒大小的灰白色坏死灶，脾脏略肿大，从十二指肠到泄殖腔均有条索状出血。鹤群出现厌食排稀粪等症状为查明原因作者对病死鹤进行了病原的分离鉴定。 1 材料与方法 1.1 病原菌的分离鉴定 (1)取肝脏、脾脏、心脏、血液在普通琼脂、麦康凯琼脂、血液琼脂、TCBS琼脂平板上划线，将接种物分别在有氧和厌氧条件下培养，24～48 h后取可疑菌落划线于普通琼脂斜面，37℃培养24 h后放入4℃保存待检。在接种的同时取病料抹片革兰氏染色镜检。 (2)取纯培养物涂片，分别进行革兰氏染色、MZN染色(改良萋纳氏染色)及运动力检查。(3)取营养琼脂培养基上分离菌的单个菌落，用生物梅里埃公司生产的ATB半自动细菌鉴定及药敏测试仪进行检测。 1.2 动物实验 将分离菌接种于普通肉汤中，37℃培养24 h，取7日龄的雏鸡3只，腹腔注射0.2 ml/只；取18～20g昆明系小鼠3只，腹腔注射0.1 ml/只。两组分别设注射生理盐水对照，单独饲养逐日观察。 1.3 药敏试验 使用K-B法，取分离菌，用灭菌的棉试子蘸取培养液均匀的涂布于营养琼脂平板培养基上，取各种抗菌药物纸片分别贴于培养基表面，各片距离要相等，37℃培养24h。2 结果 2.1 分离菌的分离鉴定 分离菌在有氧或无氧的条件下均可以生长，营养琼脂培养基形成圆形光滑、湿润黏稠、灰黄色菌落，其直径1～2 mm；麦康凯培养基形成圆形无光泽灰白色菌落直径1～2mm；血液琼脂培养基上形成大而扁平圆形、光滑湿润、黏稠的菌落，无溶血环；TCBS无菌落生长。 分离菌革兰氏染色阴性；MZN染色阴性；运动力检查阳性。 细菌API鉴定系统的检测结果 见表1。 2.2 动物实验 分离菌接种的7日龄雏鸡均在72 h内死亡，并从死亡鸡体内分离出接种菌，对照雏鸡观察1周无死亡；昆明系小鼠接种后观察1周无死亡，对照观察1周无死亡。2.3 药敏试验 对诺氟沙星、妥布霉素、新霉素高敏；卡那霉素、青霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素低敏；复方新诺明、强力霉素、呋喃妥因、麦迪霉素、羧苄青霉素、苯唑青霉素、头孢唑啉、利福平、氯林可霉素、头孢氨苄等不敏感。 表1 分离菌API鉴定系统的检测结果（略） 表1结果表明分离菌32项生化指标均符合恶臭假单胞菌的特征。 3 讨论 3.1 经对病死丹顶鹤的尸体剖检、病原微生物的分离鉴定、细菌API鉴定系统的检验、动物实验，结果证明该动物园丹顶鹤死亡的致病菌是恶臭假单胞菌。 3.2 根据资料表明，恶臭假单孢菌为鱼类的一种病原菌，常从腐败的鱼类中检出。樊海平(2001年)在论述鱼的烂腮病时提到此菌是鱼的白云病和烂腮病的病原菌，并可以引起鱼类的死亡。在冬季淡水鱼是丹顶鹤饲料的一部分，病死丹顶鹤死前食用不新鲜的鱼后腹泻，3～4后天死亡。因此我们怀疑引起丹顶鹤死亡的病原菌来自它食用的死鱼，提示在饲养丹顶鹤时要使用新鲜鱼。 3.3 在分离鉴定病原菌时，作者首先用革兰氏染色法观察细菌的形态及染色特性。得知此菌为革兰氏阴性的中等大小的杆菌，而且通过运动力的检查作者还发现本菌具有很强的运动活力。肠杆菌科、弧菌科、假单胞菌属的细菌形态都是有运动活力的杆状细菌，但是弧菌科和假单胞菌属的细菌是端生鞭毛，而肠杆菌科的细菌大多都是周生鞭毛。我们还分别用肠杆菌科和弧菌科的鉴别培养基分别进行了鉴别培养，结果本菌在弧菌培养基TCBS培养基上不生长，但是在肠杆菌科鉴别培养基麦康凯琼脂培养基上生长良好。这个结果说明此菌不属于弧菌科，但确定出种型作者运用API鉴定系统进行了鉴定。 3.4 动物实验的结果表明，恶臭假单胞菌是丹顶鹤的致死菌，同时证实对禽类有致病性，但对哺乳动物的昆明系小鼠，没有致病性。（ 佚名）